自身抗体测定在自身免疫病诊断及鉴别诊断中具有重要作用。因此，早期检测自身抗体是筛查自身免疫性疾病的重要举措^[1]。你知道目前实验室有哪些检测方法吗？目前，检测方法主要有间接免疫荧光法^[2]、免疫印迹法和ELISA^[3]、[4]等，今天给大家介绍一种自身抗体测定新方法新技术——多重微球流式荧光免疫技术。

随着自免检测技术的不断发展，国外的液相芯片技术发展迅速且日益成熟，Luminex 公司^[5]-[vi]^[7]等已形成多色编码微球检测，相比国内，该技术仍处于初步阶段，是一项尚未完全发挥全部价值的技术。多重微球流式荧光免疫技术是一种以荧光编码微球为核心，集流式细胞、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体的多指标并行分析技术平台，通量高，灵活组合，可一次同时准确定量检测100种不同的生物分子，高度自动化、稳定性好等优点，有文献报道该检测方法能弥补传统方法的弊端^[8]。

多重微珠流式免疫荧光法检测自身抗体项目：

可灵活选择抗核抗体谱检测项目，包括抗组蛋白抗体，抗着丝点抗体，抗U1-RNP抗体，抗Sm抗体，抗SSA抗体，抗SSB抗体，抗Scl-70抗体，抗Jo-1抗体，抗dsDNA抗体等等。

图1：雅典娜流式荧光诊断系统

多重微珠流式免疫荧光法检测原理

实验步骤

经过稀释的待测血清与复合悬浮微珠在孔中温育。复合悬浮微珠为不同荧光编码的聚苯乙烯微粒；不同颜色的微粒上结合有不同的抗原。如果血清中含有自身抗体，一种或多种自身抗体就会分别和不同颜色的微粒特异性地结合，温育30±10分钟后清洗微球。

加入荧光标记的羊抗人IgG 温育。标记抗体通过上一步反应固定在微粒表面的自身抗体结合。用AtheNA Multi-Lyte®系统(Luminex®仪器)对微粒悬浮液进行分析。仪器可以辨认出不同颜色的微粒，并测量出每个颗粒上的荧光强度。利用孔内校正技术，内对照颗粒上的荧光信号可以将读到的荧光强度转换成浓度结果。

检测结果判断标准：阴性样本<100AU/mL；阳性样本>120 AU/mL；临界值样本，100-120 AU/mL。

性能特点

一个检测孔同时检测多个指标。

有助于病情监测和指导临床用药。

疾病是动态发展变化的，定量诊断是一个动态的诊断过程，可以反映出疾病的发展变化状况。通过动态分析指标，可以给临床提供更加合理的诊断建议。

为了消除基质效应，排除干扰。

每项检测结果都来自于至少50个微球结果的中位值

检测板相当于反应杯，未包被任何物质。

综上所述，多重微珠流式免疫荧光技术具有快速、定量和实时数据分析等优点，因而在免疫分析领域中具有应用价值，可以为临床医师诊断相关自身免疫性疾病、确定治疗方案及判断预后提供有力的实验室依据。

[1] 刘玉枝, 代荣琴, 陈洋,等. 自身抗体对系统性红斑狼疮的诊断价值[J]. 热带医学杂志, 2016, 16(1):39-41.

[2] Venrooij W, Charles P, Maini R N. The consensus workshops for the detection of autoantibodies to intracellular antigens in rheumatic diseases[J]. Clinical & Experimental Rheumatology, 1992, 10(5):507.

[3] Emlen W, O'Neill L. Clinical significance of antinuclear antibodies: comparison of detection with immunofluorescence and enzyme-linked immunosorbent assays[J]. Arthritis & Rheumatology, 2010, 40(9): 1612-1618.

[4] Froelich C J, Wallman J, Skosey J L, et al. Clinical value of an integrated ELISA system for the detection of 6 autoantibodies (ssDNA, dsDNA, Sm, RNP/Sm, SSA, and SSB).[J]. Journal of Rheumatology, 1990, 17(2): 192-200.

[5] Li W , Zhang N , Gong P , et al. A novel multiplex PCR coupled with Luminex assay for the simultaneous detection of Cryptosporidium spp. Cryptosporidium parvum and Giardia duodenalis[J]. Veterinary Parasitology, 2010, 173(1):11-18.

[6] Anderson S , Wakeley P , WiBbErley G , et al. Development and evaluation of a Luminex multiplex serology assay to detect antibodies to bovine herpes virus 1, parainfluenza 3 virus, bovine viral diarrhoea virus, and bovine respiratory syncytial virus, with comparison to existing ELISA detection methods[J]. Journal of Immunological Methods, 2011, 366(1-2):79-88.

[7] Grangeot-Keros V . PX-2 Evaluation of new multiplex assays for the BioPlex™ 2200 (Bio-Rad): preferential Toxoplasma gondii and cytomegalovirus IgM response for recently acquired infections[J]. Journal of Clinical Virology, 2009. 46:548.

[8] 胡朝军, 李永哲, 张蜀澜,等. AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能评价[J]. 临床检验杂志, 2006, 24(005):387-388.