从建立初始定性检测单个靶序列，到实现病原体间接定量检测，再到直接绝对定量，PCR技术已发展至第三代——液滴数字PCR（Droplet Digital PCR）。ddPCR是一种基于液滴平台的核酸分子定量技术，将PCR与液滴微流控技术相结合，扩增前将含有样品的PCR预混液制备成成千上万个纳升级别的微滴，核酸分子包裹在微滴中可独立进行PCR扩增，从而实现短时间内DNA片段的指数级扩增 。随后对微滴进行逐个检测，将微滴中含靶基因片段与不含靶基因片段的液滴分别标为1和0，结合泊松分布，可计算出待检样品中的靶基因分子的具体个数或浓度。因此，ddPCR能实现对核酸分子的高灵敏度、高精确性、高特异性的无标准曲线直接绝对定量。

目前监控BK病毒感染的主流实验室检查方法有尿沉渣检测诱饵细胞、实时荧光定量PCR检测尿液和血BK病毒DNA载量以及作为诊断BKVN金标准的移植肾组织活检加免疫组化阳性等。但结合国内外文献，这些方法分别存在着灵敏度、特异度低，耗时长，损伤大等不足。基于此我科与北京新羿生物科技有限公司展开合作，设计并建立一套有效的液滴数字PCR检测BK病毒的方法，并研发成检测BK病毒的试剂盒，进一步实现肾移植受者BK病毒快速有效的检测。

设计特异性引物探针，优化反应体系并收集相应临床样本应用北京新羿生物科技有限公司Drop Maker M1样本制备仪和Chip Reader R1生物芯片分析仪对试剂盒进行验证。

新羿微液滴数字PCR平台具备一定优势。首先，设计了新型防污染微液滴生成芯片，在微滴生成之后通过密封管道将微滴转移到八连排管中，无需转移液滴，可避免模板污染。

其次，芯片分析采用准共焦光路，与荧光成像相比荧光收集效率高，分辨率高；检测单个液滴，区域小，背景噪声小；荧光传感器PMT自身灵敏度和信噪比高；阴阳性液滴区分更明显，在结果自动划分、多重反应都有明显优势。

多重防污染设计，操作流程简单易学，配合正在研发的BK试剂盒相信在不久的将来，可实现对BK病毒的更快速、更灵敏的检测。