前言

说起铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)，对于搞微生物的朋友们来说，这在临床上简直是不能更常见了。它是社区获得性感染和院内感染的常见条件致病菌，可以引起泌尿道感染、伤口感染、腹腔感染和呼吸道感染等等^[1]。它在血琼脂平板上35°C培养18-24h，形成大而扁平、湿润，有金属光泽、蓝绿色、有透明溶血环的菌落，在血琼脂平板上可形成产绿色色素的粘液性菌落。在麦康凯琼脂平板上，可形成5中不同的菌落1）典型型；2）大肠菌样型；3）粗糙型；4）黏液型；5）侏儒型^[2]。但是朋友们，橡皮样的菌落你见过面？而且它还要分化变身呢？

案例经过

患者外院“远端胃大部切除术后3月余，发现腹腔感染2月余”收入我院。腹腔引流液培养24h，血琼脂平板上发现3种革兰阴性杆菌，进行X3纯分培养24h，其中一株肺克，一株铜绿，还有一株干燥的细菌，是笔者之前在临床上没有见到过的形态。用接种环一挑整颗挑起，就跟橡皮一样，空心的，黏黏的，但是有铜绿的味道，一区有类似铜绿的金属光泽（笔者当时怀疑它是干燥型铜绿）（图1）。常规涂片时很难抹开，革兰染色发现是典型的革兰阴性杆菌（图2）。

图1：纯分培养24h后血琼脂平板上细菌形态

图2：革兰染色镜下细菌形态

纯分菌落培养24h后上机鉴定（BD），三株细菌中，只有这一株细菌没有鉴定出来，但是我们在手工KB药敏板上发现了另外有趣的现象，这一株菌的手工药敏和之前确定的那株铜绿的手工药敏一模一样。我们不禁怀疑：难道是产生了R-S转换？继续培养两天后，进一步验证了我们的猜想。

连续观察这株细菌在血琼脂平板上培养48h和72h形态（图3、图4），可以看到已经出现正常毛边的铜绿了，我们进一步纯分，质谱，药敏等操作。纯分的结果发现，干燥型铜绿培养24h后形态还是干燥的（图1），48h后会继续长出正常毛边的形态（图2），而毛边的铜绿不会发生形态改变（图5、图6）。质谱（生物梅里埃）鉴定的结果验证了两株菌都是铜绿，药敏结果也一致（图6）。

图3：纯分培养48h后血琼脂平板上细菌形态

图4：纯分培养72h后血琼脂平板上细菌形态

图5：纯分光滑型菌落培养24h血琼脂平板上形态

图6：纯分光滑型菌落培养48h血琼脂平板上形态

图7：质谱鉴定结果

案例分析

对于R-S细菌，我们首选会想到肺炎链球菌^[3]，笔者所读的微生物教材中，就有提到肺炎链球菌R-S转化实验，S型菌细胞膜外有多糖荚膜，菌落表面光滑，且具有毒性；而R型菌没有多糖荚膜，菌落表面较为粗糙，没有毒性。实验结果R型菌“转化”成了S型菌。笔者实际临床工作中，较常会遇到形态改变的大肠埃希菌，有文献报道用药后体内大肠埃希菌的形态发生改变^[4]，低温能致诺卡菌发生R-S变异^[5]，没遇到R-S转化的铜绿假单胞菌（可能不够细心遗漏了），查阅文献也少有这方面的资料。可能患者用药情况、细菌生长环境、营养条件等方面均有可能引起细菌这方面的转化，具体的原因还需要进一步的研究发现。

案例总结

这篇文章主要是笔者在临床微生物实际工作中，发现腹腔感染患者的一株“橡皮”铜绿，连续培养观察几天发现它发生了R-S转变，想借此平台将这有趣的发现跟同为检验工作者的朋友们分享一下，或许以后你也会发现这样一株橡皮样还会变化的铜绿呢。

参考文献

[1] Shi Q, Huang C, Xiao T, et al. A retrospective analysis of Pseudomonas aeruginosa bloodstream infections: prevalence, risk factors, and outcome in carbapenem-susceptible and
non-susceptible infections[J].  Antimicrob Resist Infect Control, 2019, 8: 68-77

[2] 周庭银. 临床微生物学诊断与图解(第4版)上册[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2017.9

[3]倪语星, 尚红. 临床微生物学与检验(第4版) [M]. 北京: 人民卫生出版社, 2008. 11

[4] [1]朱曼, 王睿, 张永青,等. 加替沙星和环丙沙星体外抗生素后效应期间大肠埃希菌形态学观察及膜电位和膜通透性变化[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(9):5.

[5]王华, 李岳西, 苍金荣. 低温致奴卡菌R-S变异株生物学性状的研究[J]. 国际检验医学杂志 , 2013, 34(17): 2329